Разработка подхода для молекулярной диагностики ранних стадий болезни Альцгеймера, основанного на масс-спектрометрии сверхвысокого разрешения

Разработан протокол выделения и анализа пептидной фракции плазмы крови, содержащей бета-амилоидный пептид (Аβ). Пептидные фракции плазмы, содержащие Аβ, получали после удаления преобладающих белков осаждением ацетонитрилом (ACN) с некоторыми вариациями. В результате удалось не только оптимизировать подходы для экстракции Аβ-амилоида в составе пептидных фракций плазмы, но и идентифицировать нативный Аβ методом вестерн-блот, который в дальнейшем может быть использован в качестве альтернативного контрольного метода наряду с масс-спектрометрическим анализом. На следующем этапе 2018 г. планируется применить разработанные методы и продолжить дальнейшее исследование белковой фракции, содержащей Аβ, из крови пациентов, больных болезнью Альцгеймера, а также провести исследование уровня Аβ и белка-предшественника в активированных и неактивированных тромбоцитах для установления степени участия тромбоцитов в формировании Аβ плазмы. Проведен сравнительный анализ белков плазмы крови, а также их пост-трансляционных модификаций, у пациентов с различными нарушениями когнитивной функции. Полуколичественный анализ (label-free) данных позволил выявить потенциальные белки-маркеры, характеризующие различную степень когнитивных нарушений: были выявлены 15 белков, достоверно изменяющихся в группе MCI в сравнении с группой контроля (относительное содержание некоторых из них снижается, других - повышается, часть белков претерпевают различные модификации). На следующем этапе 2018 г. планируется продолжить исследования по сравнительному анализу уровня модификаций и оценки их диагностической значимости. Особое внимание будет уделено окислительной модификации белков как одного из ранних и надежных индикаторов поражения тканей, в частности головного мозга при БА. На основе полученных данных предполагается сформировать диагностическую панель для скрининга изменений когнитивной функции, в том числе для диагностики БА.