Конструирование биолюминесцентных репортерных молекул с улучшенными свойствами для применения в биомедицинских и токсикологических исследованиях in vivo и медицинской диагностике in vitro

Проект направлен на конструирование биолюминесцентных репортерных молекул с улучшенными свойствами на основе целентеразин-зависимой люциферазы копепод Metridia longa для визуализации внутриклеточных процессов в биомедицинских и токсикологических исследованиях in vivo и применения в качестве биолюминесцентной метки при разработке иммунных и гибридизационных методов анализа in vitro для диагностики социально значимых заболеваний. Методами молекулярной эволюции планируется получить мутантные варианты люциферазы Metridia longa со сдвинутым в сторону более высоких температур оптимумом биолюминесцентной реакции, с повышенной биолюминесцентной активностью, с более медленной кинетикой спада биолюминесцентного сигнала и со сдвинутым в красную область спектром биолюминесценции. Кроме того, будут сконструированы высокоэффективные метки для молекулярной диагностики in vitro на основе люциферазы Metridia longa путем получения гибридных белков с биологически активными пептидами (миниантителом или стрептавидином). Планируется также разработать эффективный и недорогой метод получения рекомбинантных высокоактивных люцифераз Metridia longa из клеток E. coli в количествах, достаточных для изучения их физико-химических свойств, разработки тест-систем для молекулярной диагностики in vitro и последующего их производства.