Интерферометрический метод оценки нативногно состояния белков в растворе

Разработан новый метод исследования конформационного состояния белка и его взаимодействия с растворителем. Метод основан на измерении показателя преломления белкового раствора с помощью прецизионного лазерного интерферометра с погрешностью 10−7. Произведена калибровка интерферометра на основе известных зависимостей изменения показателя преломления при изменении температуры воды и изменения показателя преломления раствора NaCl при изменении концентрации. С помощью интерферометра впервые зафиксированы изменения в показателе преломления в ходе процессов протеолиза (увеличениена 9 · 10−6 и 2.4 · 10−6 показателя преломления растворов бычьего сывороточного альбумина и яичного лизоцима при гидролизе, катализируемом пепсином) и денатурации (увеличение показателя преломления на 4.5 · 10−5 в ходе реакции яичного лизоцима с гуанидин гидрохлоридом и дитиотреитолом). На основе прямых интерферометрических измерений опровергнуто широко распространенное предположение, что показатель преломления белковых растворов определяется только концентрацией белка и его аминокислотным составом и не зависит от состояния фрагментации белка. Повышенная точность интерферометра позволяет изучать инкремент показателя преломления (dn/dc) при низких концентрациях растворенных соединений (≪ 1%), а также исследовать процессы, приводящие к изменениям конформации макромолекул в растворе.