Разработка нового класса противоопухолевых препаратов, основанных на таргетной стимуляции сигнального пути STING в злокачественных новообразованиях

Отчет 201 с., 103 рис., 63 табл., 153 источника, 1 прил. STING, ЭКСПРЕССИЯ ИНТЕРФЕРОНОВ I ТИПА, DMXAA, MSA-2, SAD-2, МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО, ТРАСТУЗУМАБ, ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ, ИММУНОКОНЪЮГАТ, ИММУНОЛИПОСОМА. Объекты исследований Синтетические агонисты STING: DMXAA, MSA-2, SAD-2. Моноклональные антитела против ErbB2 (трастузумаб). Цель работы – экспериментальная проверка концепции создания целого класса противоопухолевых препаратов с новым механизмом действия для повышения эффективности лечения злокачественных новообразований. Методы, используемые в работе Методы химического синтеза, культивирование клеток; криоконсервация; микробиологические, генетические, иммунохимические и статистические методы, ПЦР. Основные результаты, полученные при выполнении I этапа проекта 1) Получены синтетические агонисты STING: DMXAA, MSA-2 и оригинальное соединение SAD-2. 2) Подобраны условия для проведения оценки активности агонистов STING методом ПЦР в реальном времени, показана дозозависимая индукция гена интерферона-бета при добавлении к клеткам линии THP-1 соединений MSA-2 и SAD-2. 3) Разработан метод оценки антипролиферативной активности соединений – активаторов STING in vitro. Показана активность соединений DMXAA, MSA-2 и SAD-2 на различных клеточных линиях в присутствии иммунных эффекторных клеток. Определены полуингибирующие концентрации IC50 на линии HT29 для соединений MSA-2 и SAD-2: 30мкМ и 0,1мкМ соответственно. Проведена оценка токсичности/переносимости соединений MSA-2 и SAD-2 на мышиной модели C57Bl/6. Показано, что MSA-2 и SAD-2 не вызывают выраженного токсического эффекта на мышей при введении 500 мкг и 200 мкг соответственно. 4) Проведен анализ качества антитела трастузумаб, полученного в растительной системе экспрессии (фитотрастузумаб). Определены показатели чистоты и специфической активности на клеточных лизатах ErbB2-экспрессирующих клеточных линий. 5) Проведена разработка методики химического конъюгирования активаторов STING с антителом, получены модельные конъюгаты с флуоресцентными соединениями: фикоэритрин, флуоресцеин и родамин В, определены показатели плотности включения. 6) Получена и исследована липосомальная форма активатора STING DMXAA. Показано, что DMXAA в липосомальной форме оказывает дозозависимое ингибирующее действие на пролиферацию мышиной меланомы B16F10 в присутствии эффекторных клеток – спленоцитов. 7) Получена и охарактеризована панель мышиных моноклональных антител против перспективной мишени опухолей желудочно-кишечного тракта – кадгерина 17. Область применения Создание противоопухолевого препарата направленного действия на основе иммуноконъюгата или иммунолипосом с действующим веществом – активатором сигнального пути STING. Степень внедрения На I этапе исследований по проекту внедрения не предполагалось. Экономическая эффективность или значимость работы Создание отечественного оригинального противоопухолевого препарата позволит повысить качество лечения онкологических больных, уменьшить смертность и инвалидизацию значительного числа пациентов – граждан России, снизить зависимость от поставок противоопухолевых лекарственных средств зарубежных производителей Прогнозные предположения о развитии объекта исследования Полученные и охарактеризованные на I этапе проекта активаторы STING, а также разработанные методики конъюгирования, будут использованы на последующих этапах для создания и характеризации прототипов разрабатываемых препаратов.