- Разработка методов малоинвазивной диагностики урологических онкозаболеваний

Основной проблемой при лечении большинства онкологических заболеваний является их бессимптомное протекание и, следовательно, обнаружение злокачественного процесса на поздних, а иногда и на последних, стадиях. Современная медицина крайне нуждается в малоинвазивных методах ранней диагностики рака, с помощью которых можно было выявить начало болезни до появления специальных симптомов. Таким образом, актуальной задачей становится поиск биомаркеров, появляющихся в биологических образцах при развитии злокачественного заболевания, а также разработка аналитических методов, способных определять крайне низкие концентрации биомаркеров в биологических образцах (кровь, моча и др.) за короткое время. Именно на решение этой проблемы направлен данный проект. Ранее нами было показано, что у больных раком почки в сыворотке крови могут обнаруживаться белок аррестин-1 и аутоантитела к нему при их отсутствии у здоровых пациентов. Имеется группа других раково-сетчаточных антигенов, экспрессирующихся в опухолевых тканях и потенциально способных выступить в качестве биомаркеров онкоурологических заболеваний: рековерин, гуанилатциклаза, родопсинкиназа, трансдуцин, фосфодиэстераза-6 и др. Конкретной задачей исследования является разработка высокочувствительного иммунохимического метода обнаружения этих антигенов и аутоантител к ним на основе разработанных заявителями уникальных технологий. А именно, ультравысокая чувствительность метода обеспечивается электрофоретическим сбором аналитов на микрочипе и использованием сканирования микрочипа суперпарамагнитными частицами для их детекции. Предполагается, что разработанная тест-система будет иметь чувствительность порядка 1-10 фг/мл аналита при времени анализа 10 минут с одновременным определением до 15 антигенов. По сочетанию этих характеристик метод не имеет мировых аналогов. Разработанные аналитические методы и тест-системы будут применены для анализа биологических образцов, полученных от пациентов, больных урологическими онкозаболеваниями, а также контрольных образцов. Планируется собрать образцы не менее чем от 300 пациентов, больных раком почки, мочевого пузыря и простаты (по 100 пациентов для каждого вида онкозаболевания), поступивших в клинику для хирургического лечения (нефрэктомии, ТУР мочевого пузыря и простатэктомии, соответственно). От каждого из этих пациентов предполагается получить следующие образцы: - сыворотка крови и моча, полученные за день до хирургической операции по удалению опухоли; - сыворотка крови и моча, полученные через 7 дней после операции; - сыворотка крови и моча, полученные через 3 месяца после операции; - сыворотка крови и моча, полученные через 6 месяцев после операции; - биопсия опухолевой ткани. Кроме того, будут получены образцы сыворотки и мочи от контрольной группы из 20 пациентов, не имеющих злокачественных заболеваний. На первом этапе будут проанализированы образцы сыворотки, полученные от больных раком почки, мочевого пузыря и простаты на содержание раково-сетчаточных антигенов и аутоантител к ним. Будет установлено количественное содержание каждого из биомаркеров с точностью до 30%. Полученные результаты будут сравнены с результатами анализа образцов сыворотки, полученных от контрольной группы. Будет произведена оценка значений чувствительности и специфичности как для каждого из биомаркеров по отдельности, так и для различных их комбинаций. Будут определены биомаркеры, присутствие которых в сыворотке специфично для каждого из исследуемых типов онкологического заболевания. Будет определено оптимальное сочетание биомаркеров, приводящее к наилучшему соотношению чувствительности и специфичности диагностического метода. Далее аналогичным образом будут проанализированы образцы мочи на содержание раково-сетчаточных антигенов. Аналогично, будут проведены оценки чувствительности и специфичности этого метода для диагностики рака почки, мочевого пузыря и простаты. Содержание антигенов и/или аутоантител к ним в сыворотке и моче будет подтверждено анализом лизатов биопсии. В случае рака простаты будет проведен анализ образцов сыворотки и мочи на содержание PSA и PSMA, будет сделан вывод о том, использование каких биомаркеров предпочтительнее для диагностики рака простаты, традиционных (PSA и PSMA) или предлагаемых в данной заявке. Будет исследована послеоперационная динамика содержания биомаркеров в сыворотке. Наконец, будет проведена оценка корреляции содержания исследуемых биомаркеров с клиническими проявлениями онкологического заболевания, такими как размер опухоли. Сама постановка задачи является новаторской, полученные результаты будут обладать абсолютной научной новизной.