Доклинические исследования с целью доказательства фармакологической активности (эффективности) и безопасности anti-GD2-САR-T-клеток для выработки наиболее вероятных показаний и обоснования возможности применения клеточного препарата в терапии глиобластомы

Одной из наиболее распространенных и агрессивных опухолей мозга является глиобластома. В настоящее время практически все методы лечения глиобластомы все еще имеют неопределенные или весьма скромные клинические результаты. Поэтому является актуальным разработка новых стратегий лечения глиальных опухолей головного мозга, способных продлить жизнь нейронкологических больных. В течение последнего десятилетия противоопухолевая иммунотерапия получила широкое распространение среди современных терапевтических подходов. Значимость иммунотерапевтических методов заключается в их способности увеличивать эффективность лечения рака и предотвращать рецидивы путем усиления системного и локального иммунного ответа против опухолевых клеток. Одним из наиболее перспективных направлений в современной иммунотерапии является CAR-T-терапия или адоптивная клеточная терапия с использованием генно-модифицированных Т-лимфоцитов. CAR-T терапия продемонстрировала высокий клинический потенциал в области онкогематологии: улучшила прогноз и общую выживаемость пациентов, включая полную неподдерживаемую (не требующую дополнительного лечения) ремиссию значительной доли больных острым лимфобластным лейкозом, исчерпавших все доступные варианты терапии. С учетом низкой выживаемость пациентов при одобренных в настоящее время стандартных методах лечения глиобластомы, решение проблемы применимости у этой категории больных CAR-T иммунотерапии является чрезвычайно актуальным. В рамках выполнения НИР запланировано решение следующих задач: 1. Проверить гипотезу (proof-of-principle) о возможности использования клеточного препарата CAR-T-клеток, специфичных к GD2 опухоль-ассоциированному антигену, который экспрессируется на поверхности клеток солидных опухолей, в частности, для лечения глиобластомы. 2. Получить модельный клеточный препарат – anti-GD2-CAR-Tm, со специфической цитотоксической активностью в отношении GD2-экспрессирующих типов солидных опухолей мышей. 3. Получить оригинальный препарат – anti-GD2-CAR-Th для проведения всего спектра доклинических исследований по оценке противоопухолевой эффективности и безопасности. 4. Оценить эффективность anti-GD2-CAR-Tm клеточного препарата на модели GD2-позитивной меланомы мыши В78-D14. 4. Оценить эффективность anti-GD2-CAR-Th клеточного препарата на гуманизированных мышах NSG с глиобластомой T98G и нейробластомой человека IMR-32 с определением терапевтической дозы и режима применения CAR-T-клеток. 4. Изучить общетоксические свойства anti-GD2-CAR-T при его однократном применении и многократном применении у мышей, крыс и кроликов. 5. Оценить специфические виды токсичности anti-GD2-CAR-T По результатам выполнения НИР будет проверена гипотеза (proof-of-principle) о возможности использования клеточного препарата CAR-T-клеток, специфичных к GD2 опухоль-ассоциированному антигену, который экспрессируется на поверхности клеток солидных опухолей, в частности, для лечения глиобластомы. Будет разработан регламент по выделению, наращиванию и активации аутологичных лимфоцитов и получен лекарственный препарат на основе соматических клеток Будет предложен комплекс подходов и рекомендаций для доклинических испытаний клеточных препаратов на основе CAR-T-клеток. Будет разработан модельный клеточный препарат – anti-GD2-CAR-Tm, со специфической цитотоксической активностью в отношении GD2-экспрессирующих типов солидных опухолей мышей. Будет проведен всесторонний анализ оригинального – anti-GD2-CAR-Th и модельного – anti-GD2-CAR-Tm препаратов. В рамках фармакодинамических исследований будет изучена противоопухолевая эффективность модельного препарата аnti-GD2-CAR-Tm на модели GD2-позитивной меланомы В78-D14 с использованием иммунокомпетентных мышей. Будет изучена противоопухолевая эффективность оригинального препарата anti-GD2-CAR-Th на гуманизированных мышах NSG с глиобластомой T98G и нейробластомой человека IMR-32 и определена терапевтическая доза и режим применения CAR-T-клеток. В рамках фармакокинетических исследованиях будет проведена оценка биораспределения клеточного продукта anti-GD2-CAR-T. В рамках оценки безопасности anti-GD2-CAR-T будет изучено влияние клеточного препарата на органы и системы органов при его однократном применении мышам и крысам (самки и самцы) и многократном применении крысам и кроликам (самки и самцы). В рамках проекта будет проведен весь спектр специфических видов токсичности клеточного препарата